Effects of supplemental xylanase on in vitro disappearance of dry matter in feed ingredients for swine / Efectos de la suplementación con xilanasa sobre la desaparición in vitro de materia seca en ingredientes de piensos para cerdos / Efeitos da xilanase suplementar no desaparecimento in vitro de matéria seca em ingredientes de rações para suínos

Abstract Background: Alternative feed ingredients are widely used in swine diets to lower feed costs, but these ingredients contain a large quantity of non-starch polysaccharides. Supplemental xylanase is known to break down non-starch polysaccharides. However, the effects of exogenous xylanase from Bacillus subtilis on various feed ingredients have rarely been compared. Objective: To evaluate the effects of supplemental xylanase on in vitro disappearance of dry matter (DM) in various feed ingredients for pigs. Methods: Nine feed ingredients were used to measure in vitro ileal disappearance and in vitro total tract disappearance of DM. Each ground ingredient was supplemented with either supplemental xylanase (9,000 U/g) or cornstarch at 1.0%. Results: Supplemental xylanase increased in vitro ileal disappearance of DM in wheat, barley, wheat flour, and wheat bran (p<0.05). The in vitro total tract disappearance of DM for barley and wheat bran increased with xylanase addition (p<0.05). Conclusion: Exogenous xylanase could increase in vitro ileal DM disappearance in barley, wheat, wheat flour, and wheat bran, but did not affect in vitro total tract DM disappearance in wheat and wheat flour.

Resumen Antecedentes: Los ingredientes alternativos se utilizan ampliamente en las dietas porcinas para reducir los costos del pienso, pero estos ingredientes contienen una gran cantidad de polisacáridos no-amiláceos. Se sabe que la xilanasa suplementaria descompone los polisacáridos diferentes al almidón. Sin embargo, rara vez se han comparado los efectos de la xilanasa exógena de Bacillus subtilis en algunos ingredientes del alimento. Objetivo: Evaluar los efectos de la xilanasa suplementaria sobre la desaparición in vitro de la materia seca (MS) en varios ingredientes alimentarios para cerdos. Métodos: Se utilizaron nueve ingredientes del alimento para medir la desaparición ileal in vitro y la desaparición del tracto total in vitro de MS. Cada ingrediente molido se complementó con xilanasa suplementaria (9,000 U/g) o almidón de maíz al 1,0%. Resultados: La xilanasa suplementaria aumentó la desaparición ileal in vitro de MS en trigo, cebada, harina de trigo y salvado de trigo (p<0,05). La desaparición de tracto total de MS in vitro para la cebada y el salvado de trigo aumentó con la adición de xilanasa (p<0,05). Conclusión: La xilanasa exógena podría aumentar la desaparición de la MS ileal in vitro en cebada, trigo, harina de trigo y salvado de trigo, pero no afecta la desaparición de la MS en tracto total in vitro del trigo y la harina de trigo.

Resumo Antecedentes: Ingredientes alternativos para rações são amplamente usados em dietas para suínos para reduzir os custos da alimentação, mas esses ingredientes contêm uma grande quantidade de polissacarídeos não amiláceos. A xilanase suplementar é conhecida por quebrar polissacarídeos não amiláceos. No entanto, os efeitos da xilanase exógena de Bacillus subtilis em vários ingredientes da ração raramente foram comparados. Objetivo: Avaliar os efeitos da xilanase suplementar no desaparecimento in vitro da matéria seca (MS) em vários ingredientesde rações para suínos. Métodos: Nove ingredientes da ração foram usados para medir o desaparecimento ileal in vitro e o desaparecimento de MS in vitro do trato total. Cada ingrediente moído foi suplementado com xilanase suplementar (9.000 U/g) ou amido de milhoa 1,0%. Resultados: A xilanase suplementar aumentou o desaparecimento ileal in vitro de MS em trigo, cevada, farinha de trigo e farelo de trigo (p<0,05). O desaparecimento in vitro de MS do trato total para cevada e farelo de trigo aumentou com a adição de xilanase (p<0,05). Conclusão: A xilanase exógena pode aumentar o desaparecimento in vitro da MS ileal em cevada, trigo, farinha de trigo e farelo de trigo, mas não afetou o desaparecimento in vitro do trato total da MS no trigo e na farinha de trigo.

Isolation of thermotolerant Bacillus subtilis DCH4 from Chancos hot spring (Carhuaz, Peru) with potential to degrade lignocellulosic agriculture wastes / Aislamiento de Bacillus subtilis DCH4 termotolerante de la fuente termal Chancos (Carhuaz, Perú) con potencial para degradar residuos lignocelulósicos agrícolas

Abstract It was isolated bacteria strains from three different types of samples: fresh water, in situ baits and ex situ enrichment. Serial dilutions were prepared and culture was carried at 50 °C using a Basal-Saline medium. Isolated strains were screened for endoglucanase and xylanase activities with qualitative (Congo Red) and quantitative (DNS) methods. Molecular 16S rDNA sequencing analysis was performed for taxonomic identification. It was isolated 31 strains of which 14 showed hydrolytic activities and belonged to Bacillus subtilis and Bacillus licheniformis species. Moreover, the strain B. subtilis DCH4 showed the highest endoglucanase activity at 45°C and pH 5, and xylanase activity at 55°C and pH 6. Then, DCH4 was cultivated by submerged fermentation with two different media supplemented with sugar cane bagasse, wheat straw, or quinoa stalk to evaluate its saccharification capability. Likewise, it was screening its xylanase and cellulase genes employing specific primers; the amplicons obtained were sequenced, and analyzed. It was found that, enzymatic extracts of DCH4 prepared with cane bagasse or quinoa stalk media achieved the highest endoglucanase and xylanase activities. According to molecular analysis of genes involved in the hydrolytic process, the endoglucanase and xylanase activities exhibited by DCH4 could be attributed to a bifunctional cellulase conformed by endo-beta-1,4-glucanase (GH5) joined to cellulose binding domain 3 (CBM3), and an endo-1,4-beta-xylanase (GH11), respectively. Further transcriptomic experiments would be considered to accomplish optimization strategies for biofuel production from lignocellulosic biomass.

Resumen Se aislaron cepas de bacterias provenientes de tres tipos de muestras: agua fresca, cebos enriquecidos in situ y ex situ. Se prepararon diluciones seriadas y el cultivo fue a 50 °C usando un medio Salino-Basal. Las cepas aisladas fueron tamizadas para las actividades endoglucanasa y xilanasa con métodos cualitativos (Rojo Congo) y cuantitativos (DNS). Se usó el análisis molecular 16S rDNA para la identificación taxonómica. Se aislaron 31 cepas, de las cuales 14 mostraron actividades hidrolíticas y pertenecían a Bacillus subtilis y Bacillus licheniformis. Además, B. subtilis DCH4 mostró la mayor actividad endoglucanasa a 45 °C y pH 5, y xilanasa a 55 °C y pH 6. Entonces, DCH4 se cultivó por fermentación sumergida con dos medios diferentes suplementado con bagazo de caña de azúcar, paja de trigo o tallo de quinua para evaluar su capacidad de sacarificación. También, se exploraron los genes de xilanasa y celulasa mediante cebadores específicos; los amplicones obtenidos fueron secuenciados y analizados. Se encontró que los extractos enzimáticos de DCH4 preparados con bagazo de caña o tallos de quinua mostraron las actividades endoglucanasa y xilanasa más elevadas. De acuerdo a los análisis moleculares de los genes involucrados en el proceso hidrolítico, las actividades de endoglunacasa y xilanasa exhibidas por DCH4 podrían atribuirse a una celulasa bifuncional conformada por una endo-beta-1,4-glucanasa (GH5) unida al dominio celulosa 3 (CBM3), y una endo-1,4-beta-xilanasa (GH11), respectivamente. Posteriores experimentos transcriptómicos podrían ser considerados para lograr estrategias de optimización para la producción de biocombustibles a partir de biomasa lignocelulósica.

Detección de manganeso peroxidasa y otras exoenzimas en 4 aislamientos de Geastrum (Geastrales) en cultivo puro / Detection of manganese peroxidase and other exoenzymes in four isolates of Geastrum (Geastrales) in pure culture

Knowledge regarding the enzymatic machinery of fungi is decisive to understand their ecological role. The species of the genus Geastrum are known to grow extremely slowly in pure culture, which makes it difficult to evaluate physiological parameters such as enzyme activity. Qualitative assays were performed on isolates of four species of this genus, showing evidence of laccase, cellulase, pectinase, amylase and lipase activity and suggesting that a wide range of carbon sources can be exploited by these species. For the first time in this genus, quantitative assays verified manganese peroxidase activity (up to 0.6 mU/g) in 30-day old cultures, as well as laccase, β-glycosidase and β-xylosidase activities.

El conocimiento de la maquinaria enzimática de un hongo es decisivo para entender su rol ecológico. Las especies del género Geastrum son conocidas por su crecimiento extremadamente lento en cultivos puros, lo que hace difícil la evaluación de parámetros fisiológicos como las actividades enzimáticas. Se realizaron ensayos cualitativos sobre aislamientos de 4 especies de este género, mostrando evidencias de actividades lacasa, celulasa, pectinasa, amilasa y lipasa, mostrando el amplio rango de fuentes de carbono que pueden ser explotadas por estas especies. Ensayos cuantitativos verificaron por primera vez en este género la actividad manganeso peroxidasa (hasta 0,6 mU/g) en cultivos de 30 días, así como también β-glucosidasa y β-xilosidasa.

Determinación del contenido extra e intracelular de algunas enzimas líticas relacionadas con pared celular en raíces de clavel (Dianthus caryophyllus L.) / Determination of extra and intracellular lytic enzymes related with carnation (Dianthuscaryophyllus L.) root cell wall / Determinação do conteúdo extra e intracelular de algumas enzimas líticas relacionadas com a parede celular em raízes de cravo (Dianthus caryophyllus L.)

En el presente trabajo se verificó la presencia de algunas enzimas relacionadas con la pared celular vegetal (poligalacturonasa, pectato liasa, proteasa y xilanasa) en raíces de clavel (Dianthus caryophyllus L.). Así mismo, se determinaron los niveles de actividad de las mismas. Estos niveles se analizaron en diferentes espacios celulares: en el fluido intercelular que hace parte del apoplasto, en el simplasto y en el tejido total de las raíces de clavel (apoplasto y simplasto). Para extraer el fluido intercelular, se ensayaron dos metodologías. Para obtener el contenido intracelular (simplasto) y el extracto total (apoplasto y simplasto) en raíces de clavel se ensayaron tres metodologías que utilizaban como solución i) extractante buffer fosfato, ii) buffer fosfato con PVPP y iii) lavados con acetona a las raíces de clavel, antes de la extracción con buffer fosfatos. Los resultados mostraron el efecto de las diferentes soluciones en las actividades enzimáticas y en el contenido de proteína. Se propuso una de estas metodologías para extraer las cuatro enzimas en un único paso y realizar análisis comparativo de actividad enzimática.

The presence of some enzymes related to cell wall (polygalacturonase, the pectate lyase, protease and xylanase) in carnation (Dianthus caryophyllus L.) roots as well as the activity levels were determined. These levels were analyzed in different cellular places: the intercellular fluid that is part of the apoplast, the symplast, and the total level (apoplast and symplast) in carnation roots. Two methods were tested to extract the intercellular fluid. To obtain the intracellular content (symplast) and total extract (apoplast+symplast), three methods were tested, using as extracting solution i) phosphate buffer, ii) phosphate buffer + PVPP, iii) before the extraction with phosphate buffer, the carnation roots were washed with acetone. The results showed the effect of different extracting solutions in the enzymatic activities and in the protein content. A new only one step method is proposed to extract the four enzymes and make the comparative analysis of enzymatic activity.

No presente trabalho foi evidenciada a presença de algumas enzimas relacionadas com a parede celular vegetal: poligalacturonasa, pectato liasa, proteasa e xilanasa e se determinaram seus níveis de atividade, em raízes de cravo (Dianthus caryophyllus L.). Os níveis se analisaram em diferentes espaços celulares: no fluido intercelular que faz parte do apoplasto, no simplasto e no tecido total das raízes de cravo (apoplasto e simplasto). Foram avaliadas duas metodologias para extrair o fluido intercelular. Para obter o conteúdo intracelular (simplasto) e o extrato total (apoplasto e simplasto) se avaliaram três metodologias que utilizavam como solução extratora i) buffer fosfato, ii) buffer fosfato com PVPP e iii) lavados com acetona às raízes de cravo, antes da extração com buffer fosfato. Os resultados mostraram o efeito das diferentes soluciones nas atividades enzimáticas e no conteúdo de proteína. Se propõem uma de estas metodologias para extrair as quatro enzimas num único passo e realizar a analise comparativa da atividade enzimática.

Xylanase activity and T2 (MRI) relationship during lulo la selva P32 ripening process / Relación entre la actividad de la xilanasa con medidas del T2 (IRM) durante el proceso de maduración del lulo La Selva P32 / Relação entre e atividade com as medidas xilanase T2 (IRM) durante a maturação lulo A Selva P32

The lulo La Selva P32 is a cross over different kinds of lulo. Though its sensory characteristics improvement, its life span is very short. Due to it is a new kind of lulo, there are not so many studies over the ripening process. In order to understand some softening processes, in this work it is evaluated the xylanase kinetics at the lulo peel during ripening, and the results are correlated with the MRI (Magnetic Resonance Imaging) relaxation time T2 . During ripening time, it is observed that the xylanase is one of the enzymes involved in the hydrolysis of the cell wall polymers. In addition, two T2 values regimes were distinguished by the xylanase kinetics. Although the correlation coefficient of 0.82 and p = 0.024 values, the results suggest that T2 weighted MRI can be useful as a non-invasive tool for ripening process monitoring.

El Lulo La Selva P32 es un fruto producto del entrecruzamiento de varias especies de lulo. Aunque tiene mejores características organolépticas, su vida útil es corta. Dado que se trata de una variedad relativamente nueva de lulo, no hay muchos estudios sobre su proceso de maduración. En este trabajo, con el fin de entender algunos de los procesos de ablandamiento de esta variedad de lulo, por una parte, se evalúa la cinética de la xilanasa en la corteza durante la maduración y, por otra parte, estos resultados se correlacionan con el tiempo de relajación T2 , de la Imágenes de Resonancia Magnética Nuclear (IRM). Durante la maduración se observó que la xilanasa es una de las enzimas involucradas en la hidrólisis de los polímeros de la pared celular. Además, a partir de los resultados de la cinética de la xilanasa, se pudieron distinguir dos regímenes de valores T2 . Aunque el coeficiente de correlación fue de 0.82 y p = 0.024, los resultados sugieren que la determinación de T2 por medio de IRM se puede utilizar como una herramienta no invasiva en el proceso de monitoreo de maduración.

O Lulo La Selva P32 é um produto fruto do cruzamento de várias espécies de lulo com um tempo de vida útil curto. Existem poucos estudos para entender os mecanismos que influenciam o amolecimento no lulillo. Este artigo se relaciona com a atividade da xilanase na casca do lulillo com a mobilidade das águas livres (tempo de relaxamento T2 ). O T2 se quantificou por imagens de ressonáncia magnética e a atividade da xilanase por métodos bioquímicos. Se observou uma tendencia no comportamiento dos valores do T2 na mobilidade das águas livres semelhantes á atividade da xilanase, associando-se a migração da água desde o exterior do fruto pela ação da enzima, involucrada na hidrólise de polímeros da parede celular. Apesar do coeficiente de correlação (0.82) e do p (0.024), os resultados sugerem que as imagens de ressonáncia poderiam ser uma alternativa nao destrutiva na indústria de exportação, visto que permite determinar o início da senescencia do fruto, baseado em condições fisiológicas e bioquímicas.

Caracterización de enzimas hidrolíticas de Aspergillus ficuum producidas en fermentación sólida sobre torta de canola / Characterization of Aspergillus ficuum hydrolytic enzymes produced in solid state fermentation of cold-pressed canola cake

En el presente trabajo, se describe la caracterización respecto al pH y temperatura de extractos semipurificados mediante ultrafiltración escalonada de las enzimas fitasa, celulasa y xilanasa de Aspergillus ficuum cepa DSM 932 producidos en fermentación en estado sólido (en adelante SSF) y usando torta de canola como sustrato. La fitasa presentó un pH y una temperatura óptima de 5.0 y 60ºC respectivamente, en tanto que la celulasa presentó un pH óptimo de 7.0 con una temperatura óptima de 60°C y el extracto de xilanasa un pH óptimo de 5.4 y una temperatura óptima de 45°C.(

This paper, describes the characterization respect to pH and temperature of semi-purified extracts by ultrafiltration step of the enzymes phytase, cellulase and xylanase produced by Aspergillus ficuum DSM 932 strain, in solid state fermentation (SSF) using cold-pressed canola cake as substrate. Phytase showed the optimal pH and temperature 6.0 and 60°C, respectively, while cellulase showed a pH optimal of 7.0 with an optimal temperature of 60°C and xylanase extract an optimal pH of 5.4 and an optimal temperature of 45°C.

Influencia de la concentración de inóculo en la producción de celulasa y xilanasa por aspergillus niger / Influence of inoculum concentration on the cellulase and xylanase production by aspergillus niger

Existe un gran interés por el uso de enzimas lignocelulolíticas en varias industrias, y en la biodegradación de biomasa para la producción de biocombustibles y otras aplicaciones. Entre las fuentes microbianas de enzimas, Aspergillus niger es uno de los microorganismos más utilizados en la producción de enzimas industriales, debido a sus niveles altos de secreción de proteína y a su condición GRAS (generally regarded as safe). El objetivo del presente estudio fue evaluar la influencia de la concentración de inóculo en la morfología y producción de celulasas y xilanasas con A. niger en cultivo sumergido. Para ello, fueron inoculados matraces de 250 mL con 40 mL de medio con 3% (v/v) de una suspensión de 104 o 108 esporas por mililitro e incubados a 28 ºC y 175 rpm durante 120 horas. Se utilizaron 10 g*L-1 de lactosa como fuente de carbono. En cada caso se determinó la cantidad de biomasa, la proteína extracelular soluble, lactosa residual, actividad celulasa total y xilanasa cada 24 horas. Aunque no hubo un efecto notorio en la morfología de crecimiento, salvo en el color y el diámetro de pellets obtenidos, sí se afectó la µmax (0,06 y 0,03 h-1 para 104 y 108 esporas*mL-1, respectivamente) y la concentración máxima de biomasa. Además, mientras que las productividades volumétricas de celulasa (ΓFPA) (8,2 y 8,0 UI.*L-1*h-1 para 104 y 108 esporas*mL-1, respectivamente) fueron similares para ambos inóculos, la productividad de xilanasa (ΓXIL) fue mayor para el inóculo más concentrado (29,7 y 33,4 UI¨*L-1*h-1 para 104 y 108 esporas*mL-1, respectivamente). Los resultados indican que la productividad de celulasas y xilanasas está estrechamente relacionada con la concentración de inóculo.

There is a great interest for the use of lignocellulolytic enzymes in several industries and in biomass degradation for production of biofuels and other applications. Among the microbial sources of enzymes, Aspergillus niger is one of the most used microorganisms in the production of industrial enzymes due to its high levels of protein secretion and its GRAS (generally regarded as safe) condition. The aim of the present study was to evaluate the influence of A. niger inoculum concentration in the morphology and production of cellulases and xylanases in submerged cultures. For this, 250 mL flasks containing 40 mL culture medium were inoculated with a 3% (v/v) of either 104 or 108 spores per milliliter suspension and incubated at 28 º C and 175 rpm during 120 hours. Lactose (10 g*L-1) was used as the carbon source. In each case, the amount of biomass, the extracellular soluble protein, residual lactose, total celullase activity and xylanase activity were determined every 24 hours. Even thought there was not a notorious effect on the growth morphology, except in color and diameter of pellets; µmax was affected (0.06 and 0.03 h-1 for 104 and 108 spores*mL-1, respectively) as well as maximum biomass concentration. In addition, while the volumetric productivity of cellulase (8.2 and 8.0 UI*L-1*h-1 for 104 and 108 spores*mL-1, respectively) were similar for both inocula, the productivity of xylanase was greater for the more concentrated inoculum (29.7 and 33.4 UI*L-1*h-1 for 104 and 108 spores*mL-1, respectively).The results show that cellulase and xylanase productivities are closely related to the inoculum concentration.

Producción y purificación parcial de enzimas hidrolíticas de aspergillus ficuum en fermentación sólida sobre residuos agroindustriales / Production and partial purification of aspergillus ficuum hydrolytic enzymes in solid state fermentation of agroindustrial residues

En el presente trabajo se describe la producción de las enzimas fitasa, celulasa, xilanasa y proteasa con Aspergillus ficuum cepa DSM 932 mediante fermentación en estado sólido (SSF) usando torta de canola y pomaza de cranberry como sustratos. Como medida indirecta de la producción de las enzimas se usó en cada caso la actividad enzimática. la torta de canola resultó ser un mejor sustrato para fitasa, celulasa y xilanasa, en tanto que la pomaza de cranberry resultó ser un sustrato potencial para proteasa. Mediante ultrafiltración escalonada fue posible purificar parcialmente los extractos enzimáticos de fitasa, celulasas y xilanasas, obtenidos a partir de torta de canola. La fitasa resultó tener un tamaño >100 kDa, en tanto que las celulasas y xilanasas presentan actividad en los retenidos de 10, 30 y 50 kDa, lo que indicaría que las isoenzimas de ambos complejos tienen pesos moleculares que oscilan entre 10 y 100 kDa.

In this paper, describes the production of the enzymes phytase, cellulase, xylanase and protease by Aspergillus ficuum DSM 932 strain, in solid state fermentation (SSF) using canola cake and cranberry pomace as substrates. The enzyme activity was used in each case as an indirect measure of the enzymes production. Canola meal turned out to be a better substrate for phytase, cellulase and xylanase, while cranberry pomace was found to be a potential substrate for protease. Various ultrafiltration operations were carried out, decreasing the cut off membranes out in order to purify partially extracts of enzymes phytase, cellulase and xylanase, obtained from canola meal. Phytase was found to have a size >100 kDa, whereas cellulase and xylanase activity present in the retained 10, 30 and 50 kDa, suggesting that isozymes of both complexes have molecular weights ranging between 10 and 100 kDa.

Efeito da adição de enzimas em dietas a base de milho e soja para frangos de corte / Efecto de la adición de enzimas a dietas basadas en maíz y soya para pollos de engorde / Effect of enzyme addition to diets based on corn and soybean for broilers

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do uso de dois complexos enzimáticos comerciais, sobre o desempenho de frangos de corte, recebendo dietas a base de milho e soja. Foram utilizados 1050 pintos de corte, de um dia de idade, machos, distribuídos em um delineamento inteiramente casualizado com cinco tratamentos e sete repetições de 30 aves cada, totalizando 35 unidades experimentais. Os tratamentos consistiram de: T1 - dieta controle, T2 - dieta com complexo enzimático A e redução de 45kcal/kg, T3 - dieta sem enzima e com redução de 45kcal/kg, T4 - dieta com complexo enzimático B e redução de 60kcal/kg, T5 - dieta sem enzima e redução de 60kcal/kg. No período de 1 a 21 dias os animais do T1 apresentaram maior consumo e pior conversão alimentar quando comparados com os animais do T5, não ocorrendo diferenças entre os tratamentos no período de 21 a 42 dias. Entretanto, considerando-se o período experimental total, o T5 apresentou uma melhor conversão alimentar (P<0,05) quando comparado ao tratamento controle. A avaliação econômica dos dados mostrou que as dietas sem enzima e com desvalorização do nível energético apresentaram menor custo de produção com desempenho produtivo semelhante às demais.

The aim of this study was evaluate the effect of use of two commercial enzymatic complex on performance of broiler chickens receiving diets on basis of corn and soy. It was used 1050 meat chicks, of one day old, males, distributed in a completely randomized experimental design with five treatments and seven replications of 30 chicks each, totaling 35 experimental units. The treatments were consisted of: T1 - control diet, T2 - diet with commercial enzymatic complex A and reduction of 45 kcal/kg, T3 - diet without enzyme and reduction of 45 kcal/kg, T4 - diet with commercial enzymatic complex B and reduction of 60 kcal/kg, T5 - diet without enzyme and reduction of 60 kcal/kg. In the period of 1 to 21 days the animals of T1 presented higher intake and worst feed conversion when confronted with chicks of T5, there were not difference among treatments in the period of 21 to 42 days. However, considering total experimental period, the T5 presented a better feed conversion (P<0,05) when compared to control treatment. Economic evaluation showed that the diets without enzyme and with desvalorization of energetic level presented lower cost of production with productive performance similar to the rest.

El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto del uso de dos complejos enzimáticos comerciales sobre el rendimiento de pollos de engorde alimentados con dietas de maíz y soya. Se utilizó 1050 pollitos de engorde, de un día de edad, machos, distribuidos en un diseño completamente al azar con cinco tratamientos y siete repeticiones de 30 aves cada uno, totalizando 35 unidades experimentales. Los tratamientos consistieron de T1 - dieta control, T2 - dieta con complejo enzimático A y reducción de 45kcal/kg, T3 - dieta sin enzima y con reducción de 45kcal/kg, T4 - dieta con complejo enzimático B y reducción de 60kcal/kg, T5 - dieta sin enzima y reducción de 60kcal/kg. En el período de 1 a 21 días los animales de T1 presentaron mayor consumo y peor conversión alimentar cuando comparados con los animales de T5, no ocurriendo diferencias entre los tratamientos en el periodo de 21 a 42 días. Sin embargo, considerándose el periodo experimental total, el T5 presentó mejor conversión alimentar (P<0,05) cuando comparado al tratamiento control. La evaluación económica de los datos mostró que las dietas sin enzima y con desvalorización del nivel energético presentaron menor costo de producción con rendimiento productivo semejante a las demás.

BÚSQUEDA DE LAS MEJORES CONDICIONES PARA LA EXTRACCIÓN Y MEDIDA DE ACTIVIDAD DE CELULASA Y XILANASA EXTRAÍDAS DE LA CORTEZA DE PITAYA AMARILLA (Acanthocereus pitajaya) / Searching the Best Conditions for the Extraction and Activity Measurement of Cellulase and Xylanase Extracted from the Yellow Pitaya Fruit Peel (Acanthocereus pitajaya)

Para pitaya amarilla (Acanthocereus pitajaya) se ha encontrado que el ablandamiento excesivo de la cáscara contribuye al deterioro del fruto, al aplicar diferentes técnicas de conservación en fresco. Dado que tanto la celulasa como la xilanasa se han vinculado con el ablandamiento de la cáscara de frutos, este trabajo se basó en la búsqueda de las mejores condiciones de extracción y medida de actividad de celulasa y xilanasa. El mejor sistema de extracción fue buffer fosfato 20 mM, NaCl 0,5 M, pH 7,0. Para la medida de actividad de celulasa es necesario incubar durante 60 min a 37 ºC, con un volumen de extracto enzimático crudo de 30 µL, empleando buffer acetato 100 mM a pH 5,0; los valores de constante aparente de Michaelis Menten (K M aparente) y velocidad máxima (V MÁX) fueron 0,279 mg/mL y 0,00014 nmol glucosa/min, respectivamente. Para determinar la actividad de xilanasa se establecieron 15 min de tiempo de incuba-ción, a 50 ºC, empleando 30 µL de extracto enzimático crudo a pH 4,0 (buffer acetato 100 mM); los valores de K M aparente y V MÁX para xilanasa fueron 0,073 mg/mL y 0,0011 nmol glucosa/min, respectivamente.

By applying different conservation techniques on yellow pitaya fruit (Acanthocereus pitajaya) it has been found that excessive softening of the peel contributes to the deterioration of the fruit. Due to that both cellulase and xylanase have been related to the softening of the fruit's peel; this work was based on the search of the best conditions not only for the extraction, but also for the activity measurement of both cellulase and xylanase. The best extraction system for both enzymes was 20 mM buffer phosphate, 0.5 M NaCl, pH 7.0. For the cellulase activity measurement it was necessary to incubate during 60 min at 37 ºC, with a volume of raw enzymatic extract of 30 µL, using buffer acetate 100 mM at pH 5,0; the values of apparent K M and V MÁX were 0.279 mg/mL and 0.00014 nmol glucose/min, respectively. To determine the xylanase activity it was necessary to incubate during 15 min, at 50 ºC, using 30 µL of raw enzymatic extract at pH 4.0 with 100 mM buffer acetate; the values of apparent K M and V MÁX for this enzyme were 0.073 mg/mL and 0.0011 nmol glucose/min, respectively.